Gramova skvrna: jak se vyrábí a k čemu je

Obsah

• Jak se provádí Gramovo barvení
• K čemu to je

Gramovo barvení, nebo jednoduše Gram, je rychlá a jednoduchá technika, jejímž cílem je odlišit bakterie podle charakteristik jejich buněčné stěny po expozici různým barvivům a roztokům.

Prostřednictvím Gramova barvení je tedy možné zkontrolovat kromě tvaru bakterií také barvu, kterou získávají, a tento výsledek je důležitý pro definování dalších strategií pro identifikaci bakteriálních druhů a pro lékaře k indikaci preventivní léčby podle mikroskopicky pozorovaných charakteristik.

Gramovo barvení se obvykle provádí rutinně v laboratoři a je součástí zkoušky bakterioskopie. Pochopte, co to bakterioskopie je a jak se to dělá.

Jak se provádí Gramovo barvení

Gramovo barvení je rychlá, praktická a levná metoda pro identifikaci bakterií odpovědných za infekce, která je užitečná pro lékaře k indikaci preventivní léčby infekce, která může nastat, protože jsou známy specifické vlastnosti těchto skupin bakterií,

Gramovo barvení se provádí v 7 hlavních krocích, avšak protokol se může lišit v závislosti na laboratoři:

1. Umístěte několik kolonií bakterií na podložní sklíčko a přidejte kapku vody pro usnadnění homogenizace kolonií;
2. Nechte to trochu zaschnout a čepel může rychle projít plamenem, aby upřednostňovala sušení, je však důležité věnovat pozornost teplotě, protože pokud je teplota příliš vysoká, je možné, že dojde ke změně struktury bakterie, které mohou ovlivnit výsledek zkoušky;
3. Když je sklíčko suché, přikryjte barvivem fialového krystalu a nechejte působit asi 1 minutu;
4. Sklíčko omyjte proudem tekoucí vody a zakryjte sklíčko lugolem, který má za cíl zafixovat modré barvivo, a nechejte působit 1 minutu. Oba typy bakterií mohou absorbovat komplex tvořený barvivem a lugolem, přičemž zmodrají;
5. Poté sklíčko omyjte pod tekoucí vodou a naneste 95% alkoholu a nechejte jej působit 30 sekund. Alkohol je zodpovědný za rozpuštění lipidové membrány, která tvoří gramnegativní bakterie, a tím za odstranění komplexu vytvořeného mezi barvivem a lugolem a odbarvením těchto bakterií. V případě grampozitivních bakterií však alkohol dehydratuje buněčnou stěnu grampozitivních bakterií, což způsobí stažení pórů a jejich nepropustnost;
6. Poté znovu opláchněte pod tekoucí vodou a sklíčko přikryjte druhým barvivem, fuchsinem nebo safraninem a nechte působit 30 sekund;
7. Poté sklíčko omyjte pod tekoucí vodou a nechte jej uschnout při pokojové teplotě.

Jakmile je sklíčko suché, je možné nanést kapku imerzního oleje a pozorovat sklíčko pod mikroskopem 100x objektivem, přičemž je možné zkontrolovat přítomnost nebo nepřítomnost bakterií, jakož i přítomnost kvasinek a epitelu buňky.

K čemu to je

Gramovo barvení má hlavní cíl diferenciace bakterií podle charakteristik buněčné stěny a obecné morfologie. Podle charakteristik pozorovaných pod mikroskopem lze tedy bakterie rozdělit na:

• Grampozitivní bakterie, které jsou vizualizovány modrou barvou kvůli tomu, že nejsou zabarveny alkoholem, protože mají silnější buněčnou stěnu a jejich póry se při vystavení lugolu stahují;
• Gramnegativní bakterie, které jsou vizualizovány růžovou / fialovou barvou, protože jsou vybledlé alkoholem a obarveny safraninem nebo fuchsinem.

Po prohlížení bakterií pod mikroskopem je možné, že budou v laboratoři provedeny další testy k identifikaci druhů bakterií. Avšak prostřednictvím Grama a asociace se známkami a příznaky, které osoba představuje, může lékař indikovat preventivní léčbu, dokud nebudou k dispozici výsledky konkrétnějších vyšetření, protože tímto způsobem je možné snížit rychlost bakteriální replikace a zabránit komplikacím.