Elektroforéza: co to je, k čemu slouží a jak se to dělá

Obsah

• K čemu to je
• Jak se to dělá
• Druhy elektroforézy
• 1. Elektroforéza hemoglobinu
• 2. Proteinová elektroforéza

Elektroforéza je laboratorní technika prováděná s cílem oddělit molekuly podle jejich velikosti a elektrického náboje, aby bylo možné stanovit diagnózu onemocnění, ověřit expresi proteinu nebo identifikovat mikroorganismy.

Elektroforéza je jednoduchý a levný postup, který se používá v laboratorní rutině a ve výzkumných projektech. Podle účelu elektroforézy může být pro dosažení diagnózy nutné provést další testy a vyšetření.

K čemu to je

Elektroforézu lze provádět pro různé účely, a to jak ve výzkumných projektech, tak v diagnostice, protože se jedná o jednoduchou a nízkonákladovou techniku.Lze tedy provést elektroforézu za účelem:

• Identifikujte viry, houby, bakterie a parazity, přičemž tato aplikace je častější ve výzkumných projektech;
• Test otcovství;
• Zkontrolujte expresi proteinů;
• Určete mutace, které jsou užitečné například při diagnostice leukémie;
• Analyzujte typy cirkulujícího hemoglobinu, které jsou užitečné při diagnostice srpkovité anémie;
• Posuďte množství bílkovin přítomných v krvi.

Podle účelu elektroforézy může být pro provedení diagnózy nutné provést u lékaře další doplňkové testy.

Jak se to dělá

K provedení elektroforézy je nutný gel, kterým může být polyakrylamid nebo agaróza v závislosti na účelu, elektroforetický pufr a vana, marker molekulové hmotnosti a fluorescenční barvivo, kromě UV nebo LED světelného zařízení, známého také jako transiluminátor.

Po přípravě gelu je třeba umístit konkrétní předmět tak, aby se jamky vytvořily v gelu, lidově zvaném hřeben, a nechat gel vytvrdnout. Když je gel připraven, naneste látky do jamek. K tomu musí být do jedné z jamek umístěn marker molekulové hmotnosti, pozitivní kontrola, což je látka, o které je známo, že to je, negativní kontrola, která zaručuje platnost reakce, a vzorky, které mají být analyzovány. Všechny vzorky musí být smíchány s fluorescenčním barvivem, protože tímto způsobem je možné vizualizovat pruhy na transiluminátoru.

Gel se vzorky musí být vložen do elektroforetické vany, která obsahuje specifický pufrovací roztok, a poté se zařízení zapne tak, aby existoval elektrický proud a následně rozdíl potenciálů, což je důležité pro separační částice podle jejich zatížení a velikost. Elektroforetická doba chodu se liší podle cíle postupu a může trvat až 1 hodinu.

Po stanovené době je možné zobrazit výsledek elektroforetického běhu transiluminátorem. Když je gel umístěn pod UV nebo LED světlo, je možné vizualizovat pruhování: čím větší je molekula, tím menší je její migrace, přiblížení ke studni, zatímco čím je molekula lehčí, tím větší je migrační potenciál.

Aby mohla být reakce validována, musí být pruhy pozitivní kontroly vizualizovány a v negativní kontrole nesmí být nic vizualizováno, protože jinak by to znamenalo, že došlo ke kontaminaci, a celý proces musí být opakován.

Druhy elektroforézy

Elektroforéza může být prováděna pro různé účely a podle jejího účelu může být použito několik typů gelu, nejběžnější je polyakrylamid a agaróza.

Elektroforéza k identifikaci mikroorganismů se běžněji provádí ve výzkumných laboratořích, avšak pro diagnostické účely lze elektroforézu použít k identifikaci hematologických onemocnění a nemocí, které se vyvíjejí s nárůstem množství proteinů, což jsou hlavní typy elektroforézy:

1. Elektroforéza hemoglobinu

Elektroforéza hemoglobinu je laboratorní technika prováděná k identifikaci různých typů hemoglobinu cirkulujících v krvi, což umožňuje identifikovat přítomnost onemocnění souvisejících se syntézou hemoglobinu. Typ hemoglobinu je identifikován pomocí elektroforézy při specifickém pH, ideálně mezi 8,0 a 9,0, se vzorem pásů, který lze porovnat s normálním vzorem, což umožňuje identifikaci abnormálních hemoglobinů.

K čemu je vyrobeno: Hemoglobinová elektroforéza se provádí k vyšetřování a diagnostice onemocnění souvisejících se syntézou hemoglobinu, jako je srpkovitá anémie a onemocnění hemoglobinem C, kromě toho, že jsou užitečné při diferenciaci talasémie. Naučte se, jak interpretovat elektroforézu hemoglobinu.

2. Proteinová elektroforéza

Proteinová elektroforéza je vyšetření vyžadované lékařem k posouzení množství proteinů cirkulujících v krvi, a tedy k identifikaci nemocí. Toto vyšetření se provádí ze vzorku krve, který se odstředí, aby se získala plazma, část krve sestávající mimo jiné z bílkovin.

Po elektroforéze lze vizualizovat vzor pruhů a následně graf, ve kterém je uvedeno množství každé frakce proteinů, což je pro diagnózu zásadní.

K čemu je vyrobeno: Elektroforéza bílkovin umožňuje lékaři vyšetřit výskyt mnohočetného myelomu, dehydratace, cirhózy, zánětu, onemocnění jater, pankreatitidy, lupusu a hypertenze podle pásmového vzoru a grafu uvedeného ve zprávě o vyšetření.

Pochopte, jak se to dělá a jak pochopit výsledek proteinové elektroforézy.